非结核分枝杆菌（NTM）是指除结核分枝杆菌复合群（包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌）与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，目前为止共发现NTM 菌种175 种和13 个亚群，其中大部分为腐物寄生菌，仅少部分NTM 对人类致病，可侵犯肺脏、淋巴结、骨骼、关节、皮肤和软组织，并可引起全身播散性疾病［1］。近年来，NTM 感染的发病率呈上升趋势，NTM 感染所带来的危害性也逐渐被重视［2］。流行病学研究结果显示，NTM 种属分布具有地域特点，本研究观察了2018—2019 年天津地区NTM 菌种分布及耐药情况，为临床诊断和治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年1月—2019年12月天津市海河医院分离出的NTM 菌株282 株，均分离自住院及门诊患者，同一患者的多份菌株按一份计算。282例NTM 分离患者中，男182例、女100例，15～40岁者75例、40～60岁者84例、≥60岁者123例。

1.2 细菌、试剂与仪器 结核分枝杆菌标准菌株H37Rv购自中国疾控中心。改良罗氏培养基及比例法药物敏感试验培养基购自珠海贝索公司，全自动分枝杆菌培养鉴定药敏仪（BACTEC MGIT960）系统及其配套试剂购自BD 公司，PCR 扩增仪（ABI7500）、恒温水浴锅、晶芯分枝杆菌菌种鉴定试剂盒、BioMixerTM芯片杂交仪、SlideWasherTM芯片干洗仪、Luxscan10K-B 微阵列芯片扫描仪购自北京博奥生物集团有限公司。

1.3 NTM 菌种鉴定方法 采用微阵列基因芯片法。取BACTEC MGIT960培养阳性菌株的菌液200 μL加入核酸提取管中，95 ℃10 min 灭活，1 200 r/min离心5 min，弃去上清液，向核酸提取管中加入50 μL核酸提取液，使用核酸提取仪振荡5 min 后放入95 ℃水浴锅中5 min，然后1 200 r/min离心1 min，取2 μL 于PCR 扩增管中，加入扩增试剂18 μL，用PCR扩增仪进行核酸扩增。扩增产物95 ℃变性5 min 后冰浴 3 min，取 6 μL 与 9 μL 杂交缓冲液混匀，将13.5 μL 杂交反应混合物加到芯片上，将杂交盒密封后水平放入芯片杂交仪中，50 ℃杂交120 min。杂交后的芯片用干洗仪进行洗涤和甩干，再通过扫描仪和相应的软件进行扫描和结果判断。

1.4 药敏试验方法 参照美国临床和实验室标准协会（CLSI）《M24-A 指南》标准，采用微量液体培养基最低抑菌浓度法进行药敏试验。选取在罗氏培养基传代培养处于对数生长期的菌落，制作1 mg/mL的菌悬液备用；阴性对照空内加入200 μL 的培养液，取100 μL 菌悬液加至培养液内混匀，每个含药空内均加入200 μL 的含菌培养液；将含菌培养液进行10 倍和100 倍稀释，分别作为阳性对照1/10 参照孔和1/100 参照孔；将药敏板密封后放入37 ℃温箱中孵育；分别于第2、3、7 天观察微孔板对照孔生长情况，判读药敏结果。药敏板中抗菌药物浓度见表1。

表1 药敏试验的抗菌药物浓度（μg/mL）抗菌药物浓度范围最小抑菌浓度异烟肼利福平链霉素乙胺丁醇左氧氟沙星莫西沙星阿米卡星卷曲霉素丙硫异烟胺对氨基水杨酸卡那霉素利福布汀氯法齐明利奈唑胺0.20～1.60 1.00～8.00 1.00～8.00 2.50～20.00 2.00～8.00 0.50～2.00 1.00～4.00 2.50～10.00 10.00～40.00 2.00～8.00 2.50～10.00 0.75～3.00 2.00～8.00 2.00～8.00敏感临界值＜0.20＜4.00＜4.00＜2.50＜2.00＜0.50＜1.00＜2.50＜10.00＜2.00＜2.50＜0.75＜2.00＜2.00中度敏感临界值-4.00 4.00 2.50 2.00 0.50 1.00 2.50 10.00 2.00 2.50 0.75 2.00 2.00耐药临界值≥0.20≥8.00≥8.00＞2.50＞2.00＞0.50＞1.00＞2.50＞10.00＞2.00＞2.50＞0.75＞2.00＞8.00

2 结果

2.1 NTM 菌种分布 282 例 NTM 菌株分为 8 种，胞内分枝杆菌占比最大，为29.08%（82/282），其次为龟/脓肿分枝杆菌（26.60%，75/282）和堪萨斯分枝杆菌（23.41%，66/282），鸟分枝杆菌占 9.57%（27/282）、偶然分枝杆菌占6.38%（18/282）、戈登分枝杆菌占3.19%（9/282）、瘰疬分枝杆菌占1.06%（3/282）、浅黄分枝杆菌占0.71%（2/282）。

2.2 NTM 对14种常用抗菌药物的耐药性 药敏试验结果显示，NTM 对异烟肼的耐药率为100%，对氨基水杨酸、链霉素、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率均高于80%。不同NTM 菌种对14 种常用抗菌药物的耐药率有种间差异，胞内分枝杆菌对利福布汀（3.7%）和氯法齐明（6.1%）的耐药率低，对其他抗菌药物的耐药率高；龟/脓肿分枝杆菌对异烟肼、链霉素和利福平的耐药率为100%，对剩余11 种抗菌药物的耐药率也较高，均在90%以上；堪萨斯分枝杆菌对异烟肼、对氨基水杨酸和卡那霉素的耐药率均高于80%，对利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、丙硫异烟胺、利福布汀、氯法齐明和利奈唑胺的耐药率均低于10%；鸟分支杆菌对丙硫异烟胺、利福布汀和氯法齐明的耐药率均较低（10%左右）；偶然分枝杆菌对左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率均低于30%；戈登分枝杆菌对左氧氟沙星、莫西沙星和利奈唑胺的耐药率极低。NTM 对14 种常用抗菌药物的耐药率见表2。

表2 NTM对14种常用抗菌药物的耐药率（%）耐药率菌种胞内分枝杆菌龟/脓肿分枝杆菌堪萨斯分枝杆菌鸟分枝杆菌偶然分枝杆菌戈登分枝杆菌瘰疬分枝杆菌浅黄分枝杆菌异烟肼100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0利福平87.8 100.0 6.1 81.5 88.9 22.2 66.7 50.0链霉素97.6 100.0 53.0 100.0 94.4 55.6 100.0 100.0乙胺丁醇76.8 97.3 7.6 85.2 94.4 33.3 66.7 50.0左氧氟沙星72.0 98.7 4.5 40.7 27.8 0.0 33.3 100.0莫西沙星54.9 97.3 1.5 18.5 11.1 0.0 33.3 50.0阿米卡星92.7 97.3 47.0 66.7 72.2 11.1 33.3 0.0卷曲霉素98.8 98.7 43.9 92.6 77.8 22.2 66.7 50.0丙硫异烟胺39.0 96.0 4.5 7.4 88.9 11.1 33.3 50.0对氨基水杨酸97.6 100.0 90.9 96.3 100.0 66.7 66.7 100.0卡那霉素92.7 96.0 80.3 77.8 94.4 22.2 66.7 50.0利福布汀3.7 96.0 3.0 7.4 72.2 11.1 33.3 50.0氯法齐明6.1 97.3 4.5 11.1 94.4 22.2 33.3 0.0利奈唑胺95.1 94.7 3.0 81.5 88.9 0.0 66.7 50.0

3 讨论

随着诊断技术的进步以及大众对NTM 病危害认识的提高，NTM 病的发病率呈上升趋势，我国第五次结核病流行病学调查结果显示，NTM 在分枝杆菌 中 的 分 离 率 为 22.9%［3］，调 查 数 据 比 1990 年（4.9%）和2000 年（11.1%）全国流行病学调查结果明显升高。临床上分离的致病NTM 菌株与菌种和分离出菌株的部位有关［4］，相关性较高的NTM 包括玛尔摩分枝杆菌（95%）、苏尔加分枝杆菌（76%）、鸟分枝杆菌复合群（56%）、脓肿分枝杆菌（35%）和龟分枝杆菌（31%），偶然分枝杆菌、戈登分枝杆菌和土分枝杆菌的临床相关性较差（1%～3%）；从无菌部位分离出的NTM 多为致病菌，从非无菌部位如痰和支气管灌洗液中分离出的NTM 要排除污染或呼吸道定植的可能。本研究检测出8 种NTM，占据前三位的NTM 分别是胞内分枝杆菌、龟/脓分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌，与我院之前报道的前三位NTM 菌种一致［5］。我国其他地区的主要NTM 菌种分布为：北京地区以胞内分枝杆菌（39.2%）和堪萨斯分枝杆菌（37.7%）为主［6］，柳州市区及周边地区以鸟分枝杆菌（50.5%）和龟/脓肿分枝杆菌（27.1%）为主，广州地区以脓肿分枝杆菌（34.0%）和胞内分枝杆菌（25.2%）为主。这些研究证明了我国检测出的优势菌及构成比有地域差异，可能原因为不同地区的气候、土壤等环境的差异，导致该地区的优势菌不同。绝大多数NTM 来自于痰或灌洗液等呼吸道标本，说明NTM 主要感染肺部；肺外NTM 感染以淋巴结炎最为常见，主要致病菌为鸟分枝杆菌复合群，在艾滋病患者中，鸟分枝杆菌引起的感染很常见；NTM 感染皮肤软组织通常与特定人群有关，龟分枝杆菌或偶然分枝杆菌引起的伤口感染时见报道。NTM 肺病与肺结核病在临床症状、影像学特征及病理学改变上常难以区分［7］，因此菌种鉴定对NTM 病的诊断具有重要意义。

用于治疗NTM 病的药物有限，治疗效果不理想，美国胸科学会和美国传染病学会建议在治疗NTM 病前应进行药敏试验，有利于指导临床用药。本研究选取了14种抗结核药进行药敏试验，结果显示，NTM 对多数抗结核药高度耐药，尤其是异烟肼耐药率达100%，对链霉素、对氨基水杨酸、卡那霉素的耐药率达80%以上，与相关文献［8］报道一致，部分NTM 对莫西沙星、丙硫异烟胺、利福布汀和氯法齐明的耐药率低。不同的NTM 菌种对抗结核药的耐药率有一定差异，胞内分枝杆菌对利福布汀和氯法齐明耐药率低；龟/脓肿分枝杆菌耐药率极高，对14种抗结核药基本无作用；堪萨斯分枝杆菌对利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、丙硫异烟胺、利福布汀、氯法齐明和利奈唑胺耐药率低；鸟分枝杆菌对莫西沙星、丙硫异烟胺、利福布汀、氯法齐明耐药率较低；偶然分枝杆菌对左氧氟沙星和莫西沙星耐药率较低。2012 年《非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识》推荐大环内酯类（克拉霉素和阿奇霉素）、氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物治疗龟/脓肿分枝杆菌和偶然分枝杆菌；临床常见慢生长分枝杆菌包括胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌，治疗通常选用大环内酯类和利福霉素类药物，有时加注射类抗结核药。因此NTM 病应在菌种鉴定的基础上，选择合适的抗菌药物进行药敏试验。

综上所述，2018—2019年天津地区NTM 菌株有8 种，以胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为主。不同NTM 菌种对14 种常用抗菌药物的耐药率有种间差异，对常规抗菌药物耐药率高，因此NTM 病治疗时应进行菌种鉴定，选择合适的抗菌药物。

［1］HENKLE E，HEDBERG K，SCHAFER S D，et of extrapulmonary nontuberculous mycobacteria infections，Ore?gon，USA，2007-2012［J］. Emerg Infect Dis，2017，23（10）：1627-1630.

［2］沙巍，肖和平. 再议非结核分枝杆菌的危害性［J］. 中华结核和呼吸杂志，2018，41（2）：83-85.

［3］全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国第五次结核病流行病学抽样调查办公室.2010 年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告［J］.中国防痨杂志，2012，34（8）：485-508.

［4］中华医学会结核病学分会，非结核分枝杆菌病实验室诊断专家共识编写组. 非结核分枝杆菌病实验室诊断专家共识［J］.中华结核和呼吸杂志，2016，39（6）：438-443.

［5］郭明日，张丽霞，周洪经，等. 非结核分枝杆菌肺病患者下呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析［J］. 中华医院感染学杂志，2016，26（20）：4641-4644.

［6］张洁，苏建荣，丁北川，等. 北京地区非结核分枝杆菌菌种分布及耐药性研究［J］. 中华结核和呼吸杂志，2017，40（3）：210-214.

［7］MORTAZ E，MOLOUDIZARGARIM，VARAHRAM M，et al.What immunological defects predispose to non-tuberculosis myco?bacterial infections［J］. Iran J Allergy Asthma Immunol，2018，17（2）：100-109.

［8］刘倩菁，张媛媛，张珍丹. 非结核分枝杆菌的耐药性分析及临床意义［J］. 中国卫生检验杂志，2020，30（3）：282-283.

文章来源：天津市工会管理干部学院学报 网址: http://tjsghglgbxyxb.400nongye.com/lunwen/itemid-52218.shtml

上一篇： 暂无
下一篇： 无机化工论文_空心NiCo_(2)S_(4)纳米球助催化剂担载ZnIn_(2)S_(4)纳米片用于可见光催化制氢(英文)